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　　一、考试项目

　　细菌革兰氏染色及镜检

　　二、仪器设备与材料

　　1．操作台、计时表、电光源显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、酒精灯、火柴、细菌固体纯培养物、接种环、载玻片、生理盐水、草酸铵结晶紫染色液、革兰氏碘液、95%酒精、稀释的石炭酸复红染色液、染色缸、染色架、洗瓶、镊子、吸水纸、搪瓷托盘、试管架、污物桶等。

　　2．工作服、一次性口罩、酒精消毒棉球、肥皂、毛巾等。

　　三、操作规范与要求

　　1．准备工作 穿着工作服，配戴口罩，清点物品。

　　2．细菌涂片 接种环火焰灭菌，蘸取适量生理盐水置于载玻片中央，再取少量细菌培养物与载玻片上的生理盐水混匀，做成涂面。

　　3．干燥 自然干燥或火焰加热干燥。

　　4．固定 火焰固定。

　　5．革兰氏染色

　　（1）将涂片置于染色架上。

　　（2）初染 滴加草酸铵结晶紫染色液，染色1～3min，水洗、甩干。

　　（3）媒染 滴加革兰氏碘液，染色1～2min，水洗、甩干。

　　（4）脱色 滴加95%酒精，脱色30s，水洗、甩干。

　　（5）复染 滴加稀释的石炭酸复红染色液，染色0.5～1min，水洗、甩干。

　　（6）干燥 用吸水纸吸干或自然干燥。

　　6．显微镜准备 取下防尘罩，接通电源，打开电源开关。

　　7．调节视野亮度 选择油镜，调节光圈、聚光器和灯泡亮度，使视野均匀、明亮。

　　8．油镜镜检 在涂片待检部位滴加一滴香柏油，将涂片固定于载物台上，正确使用粗调节旋钮和细调节旋钮，直至出现清晰的细菌图像。

　　9．结果判定 判定并报告镜检结果：革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。

　　10．显微镜保养与维护 显微镜使用完毕，关闭开关，切断电源，下降载物台和聚光器，取下涂片，将油镜头擦拭干净。套上防尘罩。

　　11．安全操作 遵循安全技术规范，注意操作安全，防止设备损坏，避免发生安全事故。

　　12．考场纪律 遵守考场纪律，服从监考人员安排。考试结束，整理所用物品。

　　四、考试时间及考试组织

　　1．考试时间：60分钟。

　　2．考试组织：采用现场实际操作形式，每位考生一个工位。